​​🧬 Генетические дефекты тканевого фактора 🧬

... встречаются очень редко и, кажется, не влияют на риски тромбоза и кровотечения.

До недавнего времени ТФ считался «неприкосновенным» для генетических аномалий, однако после обнаружения точечных мутаций его генов, в журнале Blood вышло исследование об их влиянии на гемостаз.
 
Для создания и характеристики миссенс (однонуклеотидные замены с нарушением структуры белка, но сохранением его синтеза) вариантов человеческого ТФ использовали сайт-направленный мутагенез с двумя видами плазмид для клеток млекопитающих (pCMV3-C-Flag) и кишечной палочки (pJH677). После внесения генетических изменений оценивали экспрессию ТФ, генерацию FXa, скорость активации FIX и FX, а также амидолитическую активность (т.е. способность расщеплять амидные связи, что отражает функцию сериновых протез свертывающей и противосвертывающей систем).
 
Для идентификации носителей аномальных вариантов гена FIII использовали биобанк BioMe: у отобранных участников и в группе контроля оценивали комплекс FVIIa-AT, антиген FVIIa, эндогенный циркулирующий FVIIa, антиген ТФ и Д-димер.
 
При анализе 807,162 человеческих геномов из gnomAD частых мисссенс-мутаций FIII обнаружено не было (частота минорного аллеля, MAF >0,05), а пять наиболее распространенных из них имели MAF ≈ 0,001. Стоит отметить, что обнаруженные гомозиготные варианты свидетельствуют об их совместимости с жизнью.

Мутации на позициях Asp90Asn, Gly196Arg, Lys197Asn, считающиеся редкими и снижающие функцию ТФ на 81%, 58% и 67%, подвергли дальнейшему изучению:
 
🧬  При мутации Asp90Asn происходит нарушение сборки комплекса ТФ-FVIIa и каталитическая эффективность снижается в 130 раз, а некоторые показатели оказались и вовсе недоступны для измерения. Время свертывания в таком случае значимо увеличивается, особенно при использовании плазмы с частичным дефицитом FVII;

🧬 Варианты Gly196Arg и Lys197Asn частично могут быть связаны со сниженной афинностью субстрата, но в большей степени проявляют неэффективную каталитическую активность. Для мутации Gly196Arg Kcat/Km снижен в 32,5 и 3 раза в случае взаимодействия с FX и FIX, соответственно, для Lys197Asn – в 12 и 5 раз соответственно. При подобных аномалиях также наблюдается увеличение времени свертывания.
 
По результатам исследования 30,233 образцов из биобанка BioMe было найдено два гетерозиготных носителя Gly196Arg – молодые мужчины без тромботических или геморрагических событий в анамнезе, у которых в результате сравнения с контрольными показателями было выявлено снижение уровня FVIIa-AT (p=0,022), эндогенного FVIIa (5,4 против 11,5 мМЕ/мл) и Д-димера (p=0,039), а также аутоактивации FVIIa в 4,7 раза.
 
Интересным и перспективным направлением является исследование комбинации мутаций FIII и FVII для поиска скрытых дефектов ТФ.

Новая мишень для безопасной антикоагуляции, получается?