Zmall Pharma

Постите ваше отношение ко мне в комменты :3

Сефадекс как аффинный сорбент

Удивительное - рядом! Сорбенты семейства сефадекс (Sephadex) производства легендарной фирмы Pharmacia чаще всего используются для гельфильтрации - разделение биомолекул по размеру. Есть и ионообменные сефадексы (Sephadex A50/A25 С50/С25) - но их сейчас применяют значительно реже.

Но, оказывается, сефадекс G50 можно использовать и для аффинной очистки важного для хроматографии гликопротеинов лектина - конкавалина А! Причем без всякой модификации. Сефадекс - это кросс-сшитый полимер декстрана и практически целиком состоит из множества остатков альфа-D-глюкозы. А конкавалин А способен специфически связывать остатки альфа-D-глюкозы и альфа-D-маннозы.

Получают конканавалин А (ConA) из семян растения Canavalia ensiformis (Jack bean). Значит, для очистки конкавалина А нужно всего лишь экстрагировать белок из порошка семян, осадить сульфатом аммония и дочистить на сефадексе G50.

А конкавалин А в хозяйстве очень полезный белок - если пришить его к носителю можно получить аффинный сорбент для очистки гликопротеинов.

На озоне с появлением китайских продавцов, наконец, стали доступны семена Canavalia ensiformis. Теперь добывать конкавалин А стало еще проще!

P.S. Прикрепляю описание очистки из замечательной книги Tijssen, P. (1985) Practice and theory of enzyme immunoassays.

Приходит Вовочка к отцу-академику и спрашивает:
– Пап, а в чем разница между теоретически и практически?
– Сложный вопрос ты задал, давай популяризаторов спросим

Приходят к Казанцевой:
— Ася, вот вы старому миллиардеру в жопу дадите за миллион долларов?
— Конечно, эти ж деньги помогут задаче популяризации науки!

Идут к Якутенко:
— Ирина, а вы дадите старому миллиардеру в жопу за миллион долларов?
— Конечно, многие ноют что им не хватает денег, но силы воли их заработать найти не могут. Я вот не такая, я потерплю и заработаю

Пошли к Панчину
– А вы, Александр, дадите старому милолиардеру за миллион долларов?
– Конечно, ведь на них я смогц еще ярче осветить проблемы продления человеческой жизни и приблизмть успех longevity-движения

— Вот видишь, Вовочка. Теоретически в русском сегменте популяризации 3 млн долларов. А практически – две шлюхи и один продажный пидорас

Источник видео

Адмем срочно нуждается в сижках и энергетиках, иначе больше не будем адмеметь и радовать папищеков((((999

2202 2092 5945 0590

Вся очистка - в таблице

При очистке белков обычно ведут таблицу очистки, которая позволяет оценить эффективность каждого этапа по выходу, чистоте и степени обогащения целевого белка. К сожалению, во многих дипломных работах и даже диссертациях, где описана очистка белков, такие таблицы не приводятся.

Какие параметры указывают в таблице очистки ферментов или белков с измеряемой биологической активностью:

Объем раствора.
Общий белок. Его можно определить колориметрическими методами: Лоури, Брэдфорд, BCA-assay. Определение концентрации по A280 на начальных этапах очистки нецелесообразно, поскольку присутствует слишком много мешающих компонентов.
Общая активность. Для ферментов активность измеряют в единицах активности. Для некоторых ферментов можно сразу определить и количество активного белка. Например, для трипсина можно провести титрование активного центра и установить зависимость между активностью и количеством трипсина.
Если белок обладает измеряемой биологической активностью, ее выражают в биологических единицах активности, основанных на функциональном тесте (EC50, IC50, биологическая активность, нейтрализующая активность).
Удельная активность. Это самый важный показатель степени очистки фермента. Рассчитывается как отношение общей активности к общему количеству белка. Чем выше удельная активность, тем чище препарат.
Выход, %. Показывает, какая доля целевого белка сохранилась после данного этапа очистки. Рассчитывается как отношение общей активности на данном этапе к общей активности исходного лизата.
Степень очистки. Показывает, во сколько раз увеличилась удельная активность по сравнению с исходным материалом.

Таблицу очистки проще строить, если белок обладает какой-либо биологической активностью. Но если белок не является ферментом и не проявляет измеримую активность, классическая колонка «удельная активность» уже теряет смысл. В этом случае вместо параметров активности используют показатели чистоты.

Самый простой и распространенный способ определения чистоты — денситометрия SDS-PAGE гелей (в Bio-Rad Image Lab это делается очень просто). Также можно использовать капиллярный электрофорез или ВЭЖХ (HPLC).

Таблица очистки является аналогом баланса материального потока в химической технологии. Такая таблица позволяет оценивать эффективность отдельных стадий и всего протокола в целом, выявлять узкие места, сравнивать различные протоколы и оценивать воспроизводимость методики.

Энжойте и чистите белочки эффективно и воспроизводимо!

Приходит бактериальная рибосома к MsrE белку:
— Помогите, не могу синтезировать белок, у меня вход болит!
MsrE внимательно осматривает её 50S-субъединицу, вытаскивает оттуда застрявшую молекулу антибиотика и говорит:
— Знаете что, голубушка... пока вы будете называть свой пептидный тоннель входом, он так и будет у вас болеть!

Кстати, а почему ещё никто не смоделил василиска Роко на прошивке от этой мухи?
Это что, товарищи, наше любимое гиперверие не исполним?