ИФА: Сэндвич-метод

Иммунологический метод для выявления антигенов: целевой антиген оказывается зажат между иммобилизованным и меченым антителом — как в сэндвиче.

Схема реакции

🔵Инкубация 1: образование комплекса Аг-Ат.

К носителю с иммобилизованными антителами (в лунку) добавляют раствор, в котором содержится анализируемый антиген ⏩ образование специфического комплекса.

🔵Отмывка: удаление несвязавшихся молекул антигена.

🔵Инкубация 2: образование комплекса Аг-Ат-конъюгат.

Добавляют меченные ферментом антитела (конъюгат) ⏩ образование тройного комплекса — конъюгат связывается с антигеном из комплекса Аг-Ат.

🔵Отмывка: удаления избытка конъюгата.

🔵Определение активности фермента:

1️⃣Добавление раствора хромогенного субстрата: фермент и субстрат вступают в реакцию с изменением цвета содержимого ячейки.

2️⃣Добавление стоп-реагента: для остановки ферментативной реакции.

3️⃣Определение концентрации антигена: интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию целевого антигена в пробе.

#методы #ИФА