О наболевшем: бывает такое, что #blót приходится переделывать. То не очень ровно померили белок в лизатах, то полоски на геле широко вам улыбнутся (это значит, что форез слишком быстро гнали
и не учли его потребности, вследствие чего он
устал и перегрелся, можно
посмотреть про это тут). В связи с этим становится очень актуальным вопрос хранения лизатов. Нашла
хороший документ от Термо на эту тему, где приводится сравнение разных способов хранения лизатов и разведенных антител и способы продлить им жизнь.
Лично мне кажется, редко кто будет добавлять глицерин в лизаты (хотя, может, ошибаюсь, и просто пока не встречалось), поэтому мне представляются оптимальными три варианта.
1) Если вы делаете образцы вскоре после получения лизата, то до приготовления образца их не замораживать сделать 2 аликвоты, которые далее хранить на -80.
2) Либо, если вы разделаетесь с блотом относительно быстро, то хранить лизаты до недели на +4 при наличии в буфере ингибиторов протеаз.
3) И последний вариант: после измерения тотального белка сразу ко всему лизату добавить Laemmli Sample Buffer, и тогда можно образцы не перезамораживать и хранить на +4, и если окажется, что образцы нанесены не очень ровно, то можно обсчитать референсные полоски в ImageJ и скорректировать объемы образцов (но есть большой недостаток - большой расход SB, так что это только для особо важных образцов). В случае
детекции фосфобелков я бы хранила (и хранила) лизаты только так. У меня есть коллеги, которые сразу на планшетах лизируют клетки в SB и потом делают повторный блот, - но мне это кажется лишней тратой времени.
