Халатность в очистке, или первый в мире Ni-IDA халат

Всем известны методы очистки рекомбинантных белков с гис-тэгом на IMAC-сорбентах на основе сефарозы или полиметакрилата. А как вам такое - чистить белки с помощью лабораторного халата?

Конечно, сам по себе халат не сильно поможет в очистке, а вот если его модифицировать металлохелатными лигандами - это другое дело. Меня впечатлила история Руслана про использование для активации сефарозы обычного советского разбавителя эпоксидного клея с Ozon.

Для активации нужен правильный русхимовский разбавитель - будьте внимательны, не все разбавители подходят. Нужен 1,4-диглицидиловый эфир бутандиола. Халат подходит строго из хлопчатобумажной ткани. По природе это целлюлоза, гидроксильные группы есть, можно активировать.

Протокол получения халатного сорбента:
1. Найти хлопчатобумажный халат.
2. Отрезать лоскуток (~0,5 г) и прокипятить 15 мин в растворе карбоната натрия для удаления загрязнений.
3. Поместить лоскуток в раствор для активации: 20 мл 0,6 М NaOH, 2 мг/мл боргидрида натрия, 20 мл разбавителя для эпоксидного клея и 10 мл ДМСО. Это удобно делать в фальконе на 50 мл.
4. Хорошо встряхнуть и инкубировать на качалке 8 ч при комнатной температуре.
5. Слить раствор и тщательно промыть водой (5-6 смен воды).
6. Добавить 40 мл 0,5 М карбонат-бикарбонатного буфера pH 10 с 250 мг иминодиуксусной кислоты (IDA). Я довел pH раствора карбоната натрия башкирской содой, но можно и не доводить - будет pH ~11, что, вероятно, даже лучше.
7. Инкубировать на качалке 24 ч.
8. Тщательно отмыть водой.
9. Зарядить IDA-халат никелем или медью (подойдут любые водорастворимые соли, можно растворить на глаз). 10. Затем отмыть водой, 0,5 М NaCl и снова водой.
11. Вы великолепны - получили IDA-халат для IMAC!

Для теста почистил GFP - Ni-IDA-халат работает! Емкость пока не очень высокая, есть что оптимизировать. Но начало хорошее.

Еще один протокол для энциклопедии юных постапокалиптических сурков готов!

Энжойте!