Сортировка клеток для нокаутов

1️⃣Начать необходимо с оптимизации пробоподготовки, чтобы мы были уверены, что редактируемые клетки экспрессируют мишень и специфично и селективно окрашиваются.

2️⃣Независимо от того, вносим ли мы гиды и Cas трансфекций или лентивирусной трансдукцией, искомых клеток довольно мало и перед отбором нужных стоит обогатить популяцию трансфицированными или трансдуцированными клетки антибиотиком или сортировкой в зависимости от маркера селекции в генетических конструкциях.

3️⃣А когда клетки подрастут, уже можно отсортировать популяцию, в которой нет сигнала, ориентируясь на положительный (от окрашенной популяции дикого типа) и отрицательный (не окрашенному антителами к мишени образцу) контролям.

❗️В случае сортировки негативной популяции важно подобрать вольтаж так, чтобы поместить ее полностью в положительную область. Во-первых, на приборах BD просто не будет сортировать популяция, содержащая клетки с сигналом ниже нуля, а во-вторых, для детекции редких событий важно, чтобы сигнал от них превышал электронный шум.

#FAQs_про_FACS
#flowwithglow