Ищем боррелию в клеще своими силами.

Поступил мне от читателя вопрос, ради которого я даже прервал написание очередной растительной заметки. Касался он механизма идентификации боррелий в самом клеще. Почему-то процедура эта в наших краях усложнена до невозможности. Ну а я вспомнил, что в описании канала есть словосочетание "DIYbio", а значит самодеятельная микроскопия под целевую тематику тоже подходит. Сегодня предлагаю вспомнить школьные уроки биологии и прочитать про то, как в домашних условиях, при наличии доступной техники (все оборудование без проблем находится на avito, kufar, olx и т.п.) проверить есть ли внутри пойманного на участке (или на себе) клеща потенциальные переносчики болезни Лайма - боррелии.

Использование метода микроскопии наиболее целесообразно при оценке зараженности клещей-переносчиков. Объектом изучения служит кишечник живых голодных особей, в котором боррелии обнаруживаются особенно часто.

Необходимое оборудование: микроскоп с темнопольным конденсором ОИ-13 и препаратоводителем типа СТ-12, осветитель ОИ-19 или другой системы, чистые обезжиренные предметные стекла толщиной не более 1,2 мм, покровные стекла 18 x 18 мм, заточенные препарировальные иглы. Оптимальна сухая система с общим увеличением x600 (объектив - x40; бинокулярная насадка АУ-12 - x1,5; окуляры - x10).

Для приготовления препарата из взрослого клеща на предметное стекло наносят каплю физиологического раствора (0,9%-ный раствор поваренной соли в дистиллированной воде) объемом 20 мкл, в которую помещают исследуемую особь. Придерживая клеща одной препарировальной иглой, второй надо сделать 5 - 6 надрезов брюшка и слегка надавить на него так, чтобы в физиологический раствор вытекло небольшое количество бурого по цвету материала. Этот материал, состоящий преимущественно из обрывков эпителия средней кишки и элементов ее содержимого, круговым перемещением остатков исследуемого клеща равномерно распределяют по площади 0,7 - 0,8 кв. см. Затем каплю перекрывают покровным стеклом. Такой препарат начинает подсыхать через 10 - 15 мин., поэтому его просмотр следует начинать немедленно после приготовления. При необходимости некоторое время он может быть сохранен во влажной камере (или же просто закрытая чашка Петри с увлажнённым фильтром на дне). Для просмотра препарата освещение устанавливают так, чтобы при закрытой диафрагме осветителя на наложенном на зеркало микроскопа листе бумаги можно было четко видеть изображение нити спирали лампы, что достигается передвижением патрона с ней в кожухе осветителя. После установки света открывают диафрагму осветителя, на верхнюю линзу конденсора наносят капли дистиллированной воды и помещают препарат на предметный столик микроскопа. Далее, используя объектив с небольшим увеличением (x8 - x9), поднимая и опуская конденсор, следует добиться появления в поле зрения светлого пятна, которое с помощью зеркала и регулировочных винтов конденсора выводят на середину поля. Установив объектив x40, переходят к просмотру. Поля зрения просматривают параллельными рядами так, чтобы вся площадь препарата могла быть обследована равномерно. Для этого делают соответствующие интервалы между полями зрения в одном ряду, а также между соседними рядами. В препаратах из сильно инфицированных клещей боррелий обычно удается обнаружить в самом начале просмотра. Но т.к. среди зараженных переносчиков, как правило, преобладают слабо инфицированные особи, то выявление спирохет часто требует большего объема работы. Норма просмотра, при которой препарат может считаться отрицательным, составляет не менее 200 - 250 полей зрения. Аналогичным образом можно вести и исследование нимф. При этом объем капли физиологического раствора, в которой иссекают клеща, должен быть значительно меньше (не более 5 мкл).

#DIYbio, #biosafety #ixodidae, #ticks, #lyme_disease, #biocontrol, #acarology, #microscopy