Обещал в чате дать man по разведению крафтовых стрептококков в домашних условиях.
***
Первое что нам нужно, это стерильный ламинарный бокс. Есть хорошие полевые полиэтиленовые, но здесь уж кто чем богат. Дополнительно→стекло (пробирки, чашки Петри, колбы), петелька для инокуляции, спиртовка, дозаторы-автоматы с мешками стерильных наконечников, реактивы кой-какие
1)Достаем аптечную таблетку М18, в стерильной ступке внутри шкафа измельчаем. Порошок переносим в стерильную колбу с фосфатно-солевым буфером (рН 7,4). Буфер (на 1 л):
NaCl 8 г + KCl 0,2 г + Na2HPO4 1,44 г + KH2PO4 0,24 г. Заливаем нашу таблетку 10 мл буфера, тщательно перемешиваем 2-3 минуты, чтобы отмыть бактерии от вспомогательных веществ таблетки. Это раствор №1
2)В шесть стерильных пробирок наливаем 9 мл буфера. В первую переносим 1 мл раствора №1 и тщательно перемешиваем, получаем раствор №2. В третью переносим миллилитр из второй - получаем №3. В четвертую из третьей - раствор №4. В пятую из четвертой - раствор №5. В шестую из пятой - раствор №6. Вот, это ~нужное нам разведение
3)Готовим питательную среду. Например Mitis Salivarius (на 1 л):
15 г казеина + 5 г пептона + 50 г сахара, 1 г глюкозы, 4 г K2H2PO4, 15 г агар-агара, 1 мг красителя кристаллический фиолетовый и 1 мл 1% раствора теллурита калия K2TeO3.Если в гараже такое не подъемно, то делаем кровяной агар (на 1 л):
Гидролизат казеина 12 г + гидролизат животной ткани 5 г + дрожжевой экстракт 3 г + говяжий экстракт 3 г + кукурузный крахмал 1 г + NaCl 5 г + агар-агар 14 г + дефибринированная баранья кровь 50 мл. Агар заварили, разлили в чашки Петри, оставили остывать в боксе.
4)Берем по 100 мкл суспензии №6 из п.2 и наносим на застывший агар, распределяем по поверхности стерильным шпательком. Чашки в термостат 37°C (24–48 ч), подкармливаем СО2
5)Под х1000 микроскопом оцениваем выросшие колонии, окрашиваем по Граму. Должны быть видны грамположительные темно-фиолетовые кокки, расположенные парами или в виде коротких цепочек, розового ничего быть не должно. Можно еще сделать каталазный тест - нанести на фрагмент колонии каплю 3% перекиси водорода, не должно быть никаких пузырей. Будем считать, что выросло то, что нужно
6)Готовим сердечно-мозговой бульон (на 1 л):
Вытяжка из телячьего мозга 13 г + вытяжка из свиного сердца 5 г + пептон 10 г + глюкоза 2 г + NaCl 5 г + Na2HPO4 2,5 г. В стерильную пробирку заливаем 10 мл нашего
7)Полученную суспензию выливаем в центрифугу и отгоняем 10-15 минут при 5-8 тысячах g (на заметку, абсолютный максимум в стиральных машинах - это 500 g). Желательно центрифуговать с охлаждением (5-7°C). Останавливаем центрифугу, сливаем из пробирок жидкость, осадочек выскребаем→это наша драгоценная биомасса. Можно попромывать стерильной водой или фосфатным буфером, каждый раз центрифугуя заново. По итогу нужно бактерии лиофилизировать и сохранить где кто может. Кто-то сразу в рот, а кто-то в лиофильную сушку чтобы с друзьями поделиться 😀
На фото: то, что должно вырасти в идеальном случае (помечено галочкой)
Ну как вам рецепт?
Если "легко и приятно это будет повторить в отцовском гараже"→ставь 🎉
Если "лучше уж покупать готовое за N валют"→🥴
Если "пока не определился нужны ли вообще эти "ручные" стрептококки→🌚
p.s. микробио, кстати, намного ближе к хрестоматийной магии (аля Гарри Поттер) чем химия. Как минимум из-за компонентов питательных сред. И результаты получаются интереснее, прямолинейным химическим путем не достижимые
#биопанк #биотех #микробио
