🔥 От −196 °C — к успешному осеменению
В предыдущем посте мы разобрали, как сперматозоиды выдерживают криоконсервацию и сохраняют генетический потенциал при экстремально низких температурах. Теперь поговорим о важном этапе, который происходит уже непосредственно в хозяйстве: об оттаивании. От того, насколько правильно он будет проведен, зависит жизнеспособность клеток и эффективность осеменения.

✅ Перед началом всё готовят заранее: чистый халат и косынку; микроскоп (используется для оценки подвижности сперматозоидов); предметные и покровные стекла; водяную баню с термометром или оттаиватель 38-40°C; тампонницу с тампонами, пропитанными 70% спиртом; ампулу с цитратом натрия; таймер; пинцет; инструмент для ИО и другие необходимые инструменты для оттаивания и осеменения в зависимости от вида фасовки спермодозы и т.д.

✳️ Сначала специалист надевает халат и косынку, а также моет руки. После этого необходимо обработать рабочие инструменты и поверхности спиртовыми тампонами, разместить обработанные инструменты на подставке, вскрыть и поставить нагреваться ампулу цитрата натрия на 2-3 минуты.

✳️ Тампоном обрабатывают пакет с инструментом для ИО и надрезают пакет стерильными ножницами. Специалист надевает защитные очки и перчатки.

✳️ Канистру или тубу с семенем не поднимают выше горловины сосуда Дьюара и держат в верхней трети горловины не более 5 секунд. Предварительно охдажденным и стерильным пинцетом извлекают одну соломинку, а затем колебательными движениями (2-3 движения) убирают остатки азота и немедленно погружают ее в водяную баню. Канистру с оставшимся семененем опускают обратно в сосуд Дьюара. и закрывают его. Если нужную дозу найти не удалось — канистру снова опускают минимум на 15 секунд.

✳️ Семя в гранулах извлекают стерильным, предварительно охлажденным пинцетом и опускают ее в подготовленную ампулу с цитратом натрия.

✳️ Погруженную в воду пайету держа малым пинцетом необходимо медленно перемешать. Оттаивание проводят в течении 10 секунд при температуре 38°C.
Гранулы оттаивают при температуре 40°C не менее 10 секунд (до появления тонкого стерженька). Осторожными круговыми движениями флакона перемешивают сперму, а потом ставвят на стол на салфетку.

✳️ После оттаивания пайету вытирают насухо салфеткой. Проверяют наличие воздушного пузырька у края соломинки: в случае смещения пузырька встряхнуть соломинку.

✳️ Затем соломинку устанавливают в предварительно согретый шприц для искусственного осеменения и отрезают конец соломинки на расстоянии 7 мм строго перпендикулярно через воздушный пузырек.

✳️ При проведении оценки подвижности семени важно помнить, что она проводится при температуре 38°C на нагревательном столике под микроскопом. Для этого используют каплю подогретого цитрата натрия к капле семени на подогретое предметное стекло и накрывают также подогретым покровным стеклом. Оценку проводят по общепринятой методике.

В зависимости от способа фасовки семени применяются разные правила оттаивания, которые можно найти в Приказе №102 от 18.03.16 "Об утверждении условий применения биотехнологических методов искусственного осеменения племенных коров и телок".

Главное правило после оттаивания: никакого повторного охлаждения и резких перепадов температуры. Осеменение проводят в сжатые сроки — размороженную спермопродукцию рекомендуется использовать в течение 10 минут после оттаивания.

💡Правил немного, и сама техника несложная. Но именно их последовательное соблюдение помогает сохранить семя и добиться успешного осеменения.