پرونده: یک باند؛ چند شرایط آزمایشی
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
هر lane در یک Western blot باید نماینده نمونه و شرایط آزمایشی مشخصی باشد؛ اما چه اتفاقی می‌افتد اگر یک باند یکسان، چند بار و با برچسب‌های درمانی متفاوت نمایش داده شود؟
ماجرا به مقاله‌ای برمی‌گردد که در سال ۲۰۱۴ در ژورنال Diabetes منتشر شد. این مطالعه گزارش کرده بود که حذف آنزیم Myeloperoxidase می‌تواند از چاقی و مقاومت به انسولین ناشی از رژیم غذایی پرچرب جلوگیری کند.
مقاله بعدها به درخواست University of Oklahoma Health Sciences Center (OUHSC) ریترکت شد. براساس اطلاعیه رسمی، بررسی دانشگاه درباره یکپارچگی داده‌های مقاله به این نتیجه رسید که چندین شکل Western blot جعل شده‌اند.
در اطلاعیه، موارد مشخصی فهرست شده بود:
▫️ در Fig. 7G، باندهای lanes 2 و 4 در blot مربوط به P-Akt (S473) تکراری بودند، اما با treatmentهای متفاوت نمایش داده شده بودند.
▫️ در Fig. 7H، باندهای lanes 3، 6 و 7 در blot مربوط به P85 تکراری گزارش شدند.
▫️ تصویر IRS-1 در Fig. 7H، در مقاله دیگری و با برچسب‌های درمانی متفاوت دوباره استفاده شده بود. چهار lane ابتدایی آن نیز در شکل دیگری از همان مقاله دوم ظاهر شده بودند.
▫️ در blot مربوط به P-IRβ، lanes 1 و 4 تکراری بودند.
▫️ در Fig. 7I نیز lanes 1، 3، 5 و 7 از blot مربوط به 3-NT تکراری گزارش شدند.
هیئت اخلاق علمی انجمن دیابت آمریکا نیز با گزارش تحقیق OUHSC موافقت و اطلاعیه ریترکشن را تأیید کرد.
💡 این پرونده چه درسی برای کاربران Western blot دارد؟
شباهت دو باند به‌تنهایی همیشه اثبات‌کننده دست‌کاری نیست؛ باندهای واقعی ممکن است ظاهری مشابه داشته باشند. اما در این پرونده، تکرارها در یک بررسی رسمی احراز شده بودند و تصاویر یکسان به شرایط آزمایشی متفاوت نسبت داده شده بودند.
هر lane باید زنجیره‌ای قابل‌ردیابی داشته باشد:
Sample ID → Experimental condition → Raw image → Processed image → Final figure
اگر این ارتباط از بین برود، دیگر نمی‌توان مشخص کرد که باند منتشرشده واقعاً متعلق به کدام نمونه و کدام آزمایش است.
برای پیشگیری از چنین مشکلاتی:
▫️ داده‌های Lane map را ثبت کنید
ترتیب نمونه‌ها، Treatment، غلظت و زمان تیمار را هنگام اجرای ژل ثبت کنید؛ نه در زمان آماده‌سازی مقاله.
▫️ فایل خام و Full-length blot را نگه دارید
تصاویر اصلی، همه Exposureها و blot کامل باید همراه با تاریخ، نام آزمایش و شناسه نمونه آرشیو شوند.
▫️ نسخه‌های پردازش‌شده را از Raw data جدا کنید
فایل اصلی را بازنویسی نکنید و مسیر تبدیل فایل خام به شکل نهایی را قابل‌ردیابی نگه دارید.
▫️ پیش از ارسال، Figure audit انجام دهید
شکل‌ها را از نظر تکرار lane، استفاده مجدد از پنل، اشتباه در برچسب‌گذاری و ناسازگاری با سوابق آزمایش بررسی کنید.
▫️ استفاده مجدد از کنترل‌ها را بدیهی ندانید
یک Loading control فقط زمانی می‌تواند میان چند پنل مشترک باشد که داده‌ها واقعاً از همان blot و همان مجموعه نمونه‌ها آمده باشند و این موضوع شفاف گزارش شود.
در این پرونده، اطلاعیه رسمی از واژه falsified استفاده کرده است؛ بااین‌حال، از متن اطلاعیه نمی‌توان درباره نقش یا قصد تک‌تک نویسندگان نتیجه‌گیری کرد.
شما چطور؟
در آزمایشگاه شما، ارتباط میان فایل خام Western blot، ترتیب laneها و شکل نهایی چگونه ثبت و بازبینی می‌شود؟
🔗 اطلاعیه رسمی ریترکشن:
https://doi.org/10.2337/db21-rt08c
🔗 مقاله اصلی:
https://doi.org/10.2337/db14-0026
#Retraction_Files #WesternBlot
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
@Connectosome