Деревенская энзимология

Как можно исследовать активность ферментов в деревенских условиях? Для теста отлично подходит метод радиальной диффузии в геле. Гель (агароза) полимеризуется с субстратом, в него вносятся образцы. Ферменты диффундирует в гель и на своем пути гидролизуют субстрат. После окраски активность проявляется в виде неокрашенных кольцевых зон.

Так как агарозы в деревне нет, вместо него взял агар-агар из магнита, субстраты желатин (для протеаз) и крахмал (для амилаз).

Приготовил на PBS два 3% геля из агар-агара с желатином и крахмалом, залил в чашки Петри и сделал отверстия. В 2 отверстия нанес разный объем экстракта собачих какашек в PBS, в 2 - экстракт мезима. И оставил инкубироваться в теплой бане.

На следующий день покрасил гель с желатином - кумасси, с крахмалом - йодом. Есть активность!

Протеазная активность наблюдалась и в экскрементах собаки и для мезима (причем видна даже без покраски). Амилазной активности в образцах собаки не было (вот собака!), но мезим сработал.

#education