Как получить аффинный сорбент

Аффинная хроматография - это эффективный метод очистки белков, основанный на специфическом сродстве белка и закрепленного на носителе (матрице) лиганда.

Часть аффинных сорбентов доступна коммерчески, но довольно часто нужный сорбент невозможно купить, и его приходится синтезировать самостоятельно.

Существует много интересных подходов разной степени сложности. Не все из них легко реализовать в обычной лаборатории. В серии постов расскажу общий подход к иммобилизации белков на сорбенте в условиях стандартной молбио/биохимической лабы.

Самый простой способ получить аффинный сорбент - использовать коммерческие предактивированные матрицы. Они удобны в работе, безопасны и часто дают более высокую емкость по сравнению с самодельными вариантами. Обычно активная группа соединена с матрицей через спейсер, что снижает стерические ограничения при связывании таргетного белка. Сама процедура иммобилизации максимально простая: как правило, достаточно добавить белок в подходящем буфере и подождать. Но, конечно, такой подход заметно дороже самодельных решений.

Если вам ближе путь самурая, вот несколько книг, которые я рекомендую тем, кто хочет разобраться в синтезе аффинных сорбентов:
1. Greg T. Hermanson. Bioconjugate Techniques. Безусловный номер один. Подробнее про нее тут.
2. David M. Jameson, Shan S. Wong. Chemistry of Protein and Nucleic Acid Cross-Linking and Conjugation (2012). Больше внимания уделено химии процессов, хорошая книга.
3. Дин П. Аффинная хроматография. Методы (1988). Перевод на русский, хорошая книга с разбором классических методов активации и даже описанием получения самих сорбентов.