Сколько белка на аффинном сорбенте?

При синтезе аффинных сорбентов полезно не только удостовериться, что белок иммобилизовался на шариках, но и определить сколько именно село.

Часто в протоколах приводят метод определениях концентрации лиганда путем измерения его содержания в исходном растворе и в проскоке после иммобилизации. Но мне кажется, так не совсем точно, часть белка остается в порах и уходит при промывке, а там белок разбавленный, толком не измеришь.

Но есть интересный способ определения концентрации иммобилизованного белка методом прямой спектрофотометрии сорбента.

Для этого нужно налить в кювету 100% глицерин, суспендировать небольшое количество промытого и подсушенного на фильтре сорбента с иммобилизованным белком. Перемешивать нужно аккуратно, чтобы не попали пузырьки воздуха. Глицерин предотвращает осаждение частиц и облегчает измерение.

Потом остается измерить поглощение при 280 нм против взвеси сорбента без белка. Вообще, можно еще и калибровочную кривую сделать, добавляя известное количество белка к суспензии исходного сорбента.

В литературе олды пишут еще про полиэтиленгликоголь и другие оптически прозрачные вязкие жидкости (концентрированный раствор сахарозы, этиленгликоль), но я только с глицерином делал.

Энжойте!