Сефадекс как аффинный сорбентУдивительное - рядом! Сорбенты семейства сефадекс (Sephadex) производства легендарной фирмы Pharmacia чаще всего используются для гельфильтрации - разделение биомолекул по размеру. Есть и ионообменные сефадексы (Sephadex A50/A25 С50/С25) - но их сейчас применяют значительно реже.
Но, оказывается, сефадекс G50 можно использовать и для аффинной очистки важного для хроматографии гликопротеинов лектина - конкавалина А! Причем без всякой модификации. Сефадекс - это кросс-сшитый полимер декстрана и практически целиком состоит из множества остатков альфа-D-глюкозы. А конкавалин А способен специфически связывать остатки альфа-D-глюкозы и альфа-D-маннозы.
Получают конканавалин А (ConA) из семян растения
Canavalia ensiformis (Jack bean). Значит, для очистки конкавалина А нужно всего лишь экстрагировать белок из порошка семян, осадить сульфатом аммония и дочистить на сефадексе G50.
А конкавалин А в хозяйстве очень полезный белок - если пришить его к носителю можно получить аффинный сорбент для очистки гликопротеинов.
На озоне с появлением китайских продавцов, наконец, стали доступны семена
Canavalia ensiformis. Теперь добывать конкавалин А стало еще проще!
P.S. Прикрепляю описание очистки из
замечательной книги Tijssen, P. (1985) Practice and theory of enzyme immunoassays.