#it_is_Friday_my_fellows

Привет, коллега!

Наука - это всегда не так легко и просто, как показывают в фильмах: загрузил пробирку в центрифугу, а на экране компьютера тебе высветилось модель ДНК со всеми мутациями. Часто это долгий и муторный процесс, в котором успешному эксперименту предшествуют десятки попыток. И если ты только начал свой путь и у тебя что-то не получается, то это абсолютно нормально. Да даже если ты уже полжизни работаешь, но что-то не выходит - это тоже абсолютно нормально. Мы когда-то обсуждали тему лабораторных факапов и сегодня предлагаю её продолжить и поделиться своими случаями бесконечных проб и ошибок перед получением хоть какого-то результата.

По традиции я начну. Все эти истории заняли не один месяц и пришлись в основном на аспирантуру.

😎 После окончания университета я перешла работать с биофака МГУ на ФФМ МГУ и на новом месте ставила методику выделения тучных клеток. Для этого метода клетки наслаиваются на градиент вязкого вещества FiColl и при центрифугировании тучные клетки проходят в него, а все остальные - нет. Я стала делать все те же действия, что и всегда, но клетки не проходили в нужный слой. Я пробовала менять концентрации, лучше выделять первичную популяцию, центрифугировать на других оборотах, но ничего не помогало. Проблема оказалась в центрифуге. Смысл в том, что на биофаке была центрифуга с бакет ротором и клетки проходили в центральной части пробирки, формирую такую туманность в вязком FiColl. В новой лаборатории центрифуга была с угловым ротором и клетки садились на стенку пробирки, их было плохо видно и они нормально не отбирались. В итоге я сменила технику отбора клеток и всё заработало.

😕 Второй случай был уже ближе к концу аспирантуры. Мы хотели сделать эксперименты на изолированных кардиомиоцитах. Для их выделения сердце перфузируют по Лангендорфу раствором коллагеназы. У меня получилось даже собирать аппарат для перфузии из подручных материалов, но я видимо проспала все занятия по биохимии и несколько месяцев пыталась сделать это с помощью коллагеназы IV типа, а не правильной II типа. Естественно, нихрена не растворялось, научный руководитель не перепроверил фермент и в итоге мы забили на этот эксперимент. То, что коллагеназа была неправильной я поняла уже сильно позже, когда начала выделять клетки из других органов.

😲 И последняя история про то, что иногда нужно доверять своим сотрудникам. Это было уже после аспирантуры, в новой лаборатории я осваивала иммуногистохимию. И было одно антитело против pAMPK, которое ну никак не работало. Я меняла протоколы фиксации и окрашивания, делала разные варианты демаскировок, пробовала другие ткани, но нет. Несколько месяцев я пыталась убедить руководителя, что не у меня руки из жопы, а антитела не работают. В итоге в какой-то момент я получила антитела другой фирмы и, о чудо, они сработали. Без всяких ухищрений. Плюс, конечно, в этой ситуации тоже есть, ИГХ я освоила в совершенстве.

➖➖
Вот такие у меня истории про убитое время, но приобретенный опыт, пишите в комментариях свои ⬇️